1. 玻璃仪器的清洗
实验中所用的玻璃仪器清洁程度直接影响实验结果,尤其在生物化学实验中,玻璃仪器的清洁要求更高。这是因为生物化学实验中涉及的蛋白质、酶、核酸等物质通常以“毫克”或“微克”计量,稍有杂质便可能导致实验误差甚至失败。此外,生物化学实验对金属离子(如钙、镁离子)、去污剂和有机物残留等污染物极为敏感。因此,玻璃仪器(包括离心管等塑料器皿)的彻底清洗至关重要。
1.1 初用玻璃仪器的清洗
新购买的玻璃仪器可能附着游离的碱性物质,需按照以下步骤清洗:
- 用0.5%的去污剂清洗表面。
- 用自来水冲洗干净。
- 将仪器浸泡在1%~2%的盐酸溶液中过夜(至少4小时)。
- 再次用自来水冲洗,最后用无离子水冲洗两次。
- 在100℃~120℃的烘箱内烘干备用。
1.2 使用过的玻璃仪器的清洗
使用过的玻璃仪器清洗步骤如下:
- 用自来水洗刷至无明显污物。
- 使用毛刷沾取去污剂(粉)清洗,或将仪器浸泡在0.5%的清洗剂中进行超声清洗(注意:比色皿不可超声清洗)。
- 用自来水彻底冲洗去污剂残留,再用无离子水冲洗两次。
- 烘干备用(计量仪器不可烘干)。
- 清洗后,器皿内外不应挂有水珠;如有水珠残留,需重新清洗。
1.3 比色皿的清洗
比色皿(石英或玻璃材质)清洗时需特别注意:
- 避免使用强碱清洗,以免损坏抛光表面。
- 可使用洗液或1%~2%的去污剂浸泡,再用自来水冲洗。
- 使用绸布包裹的小棒或棉花球棒刷洗,确保内外壁无水珠。
2. 塑料器皿的清洗
聚乙烯、聚丙烯等塑料器皿在生物化学实验中应用广泛。清洗步骤如下:
- 首次使用时,用8mol/L尿素(用浓盐酸调至pH=1)清洗。
- 依次用无离子水、1mol/L KOH、无离子水清洗。
- 用10^-3 mol/L EDTA溶液清除金属离子污染。
- 最后用无离子水彻底清洗。
后续使用时,可用0.5%的去污剂清洗,再用自来水和无离子水冲洗。
3. 洗液的配制
洗液在清洗过程中至关重要,但需注意安全操作,尤其是涉及重铬酸钾的配制。以下是常用洗液的配制方法:
- 重铬酸钾洗液:取100mL工业浓硫酸置于烧杯中,小心加热,缓慢加入5g重铬酸钾粉末,搅拌至溶解,冷却后储存于磨口玻璃瓶中。
- 工业浓盐酸:用于清洗水垢或无机盐沉淀。
- 5%草酸溶液:加入数滴硫酸酸化,可清除高锰酸钾痕迹。
- 30%硝酸溶液:适用于清洗二氧化碳测定仪及微量滴管。
4. 玻璃和塑料器皿的干燥
生化实验中,玻璃和塑料器皿的干燥通常在110℃~120℃的烘箱或烘干机中进行。避免使用丙酮荡洗后吹干的方法,以防有机物残留干扰实验。需要注意的是,硝酸纤维素制成的塑料离心管不可加热,否则可能发生爆炸。
5. 移液技术
移液技术是生物化学实验中重要的基本操作。常用的移液工具包括滴管、移液管、微量进样器和自动取液器。以下是常见移液工具及其使用注意事项:
- 滴管:适用于半定量移液,常见容量为1mL~5mL。
- 移液管:分为无分度和分度两种,使用前需清洗至内壁不挂水珠。
- 自动取液器:适用于多次重复的快速定量移液,精密度高,操作便捷。
6. 缓冲溶液的配制与使用
缓冲溶液在生物化学实验中用于维持pH稳定。常见缓冲液包括磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、有机酸缓冲液等。配制时需根据实验要求选择合适的缓冲体系,并注意温度、浓度等因素对pH的影响。
7. pH值的测定
pH值测定是实验室常见操作,可通过pH试纸或pH计进行。使用pH计时需注意电极的校正和维护,以确保测量精度。