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生物素标记寡核苷酸探针原位检测石蜡切片鸭瘟病毒核酸

时间:2010-09-21 17:02来源: 作者: 点击: 156次
【文 摘】据GenBank中有关鸭瘟病毒(DPV)的1个765bp的EcoR I片段序列,用Oligo软件设计长度为37bp的寡核苷酸并用生物素标记制备探针,经blast分析和斑点杂交检测探针的特异性后,建立从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法并对人工感染死亡鸭的各组织器官进行检测,结果显示:(1)寡核苷酸探针能特异性检测到DPV强毒CHv株DNA,对鸭病毒性肝炎病毒QL79株RNA、血清1型鸭疫里默氏杆菌DNA、鸭源多杀性巴氏杆菌DNA、鸭沙门菌DNA和大肠杆菌DNA的检测结果为阴性。(2)以寡核苷酸探针建立的从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法的最佳反应条件为:组织切片先用O.2mol/LHCI37℃处理20min,然后用100mg/L的蛋白酶K37℃消化15min左右;杂交时探针工作浓度为350μg/L;Avidin-AP的工作稀释度为1:100。(3)以所建立的原位杂交法检测DPV-CHv强毒人工感染死亡鸭的各组织器官,结果肝脏、肠道、法氏囊、脾脏、食道、肺脏扣肾脏呈阳性反应,DPV的DNA分布于特定细胞的细胞浆和细胞核。结果表明,原位杂交检测石蜡切片中DPV的方法具有直观、特异性强的优点,是对DPV进行检测和病原定位的良好方法,可用于DPV的侵染过程和致病机理研究及回顾性诊断检测。 (责任编辑:glia)
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