硫酸铵沉淀法是蛋白质分离与纯化实验中常用的经典技术。该方法通过调节硫酸铵溶液的饱和度,使不同蛋白质依次沉淀,从而实现分离。硫酸铵的饱和度与溶液温度密切相关,通常以25℃为标准。以下为常用的硫酸铵饱和度计算表,便于实验人员快速查阅。
硫酸铵溶液饱和度计算表(25℃)
| 目标饱和度(%) | 每升溶液需加硫酸铵(g) |
|---|---|
| 10 | 56 |
| 20 | 114 |
| 25 | 144 |
| 30 | 176 |
| 33 | 196 |
| 35 | 209 |
| 40 | 243 |
| 45 | 277 |
| 50 | 313 |
| 55 | 351 |
| 60 | 390 |
| 65 | 430 |
| 70 | 472 |
| 75 | 516 |
| 80 | 561 |
| 90 | 662 |
| 100 | 767 |
使用方法:假设要将1升溶液从0%饱和度调整至50%,需加入313克硫酸铵。若已含一定饱和度,则需查表计算差值。
机制解释:硫酸铵能够通过“盐析”作用降低蛋白质溶解度,使其逐步沉淀。不同蛋白质在不同饱和度下沉淀,适用于蛋白分级分离。实验时应缓慢加入硫酸铵并充分搅拌,避免局部过饱和导致蛋白变性。
参考文献:
1. Englard S, Seifter S. Precipitation techniques. Methods Enzymol. 1990;182:285-300.
2. Scopes RK. Protein Purification: Principles and Practice. Springer, 1994.