提供一种星型胶质细胞的纯化培养方法:

1．  分离大鼠胚胎（16-18周）新皮层，置于L-15（或Hank’s平衡盐/DMEM溶液，无Hepes）培养基中，除去脑膜和血管、海马、尾核和其他非皮层组织。
2．  用解剖刀将其切成1mm3大小的组织块。
3．  用1ml枪头转移250μl胶原酶储存液（1.33%，溶于L-15中）到1ml的L-15（或D-MEM）中。每2只鼠脑组织块使用1-1.5ml稀释胶原酶液。
4．  37℃水浴中孵育30min.
5．  1000rpm(大约230g)中离心5min，或3000rpm(大约2000g)中离心1min。
6．  去上清。
7．  在含EDTA-CMF的溶液中重悬细胞，并与胰蛋白酶以1：4～1：10比例混合。可以根据观察到的细胞消化的情况，适当调整两者的比例。
8．  加入胰蛋白酶的抑制剂和DNase溶液，混合5分钟。
9．  1000rpm(大约230g)中离心5min，或3000rpm(大约2000g)中离心1min。
10．去上清。加入500μl D-MEM-BS。
11．轻轻吹打成单细胞悬液，开始用5ml枪头吹打10次，在需要时用18-gauge的针头吹打。( 注意：不要产生气泡。）200目/300目尼龙网过滤。
12．将细胞转移到含10%FCS-DMEM的培养瓶中，培养密度为2X106/25cm2培养瓶，4～6 X106/75cm3培养瓶。在37.2℃，37.5%中培养。
13．第2天换液，以后每隔3天换液。
14．7-10天，细胞发生融合。
15．细胞融合后，将瓶盖用封口膜密封好，在轨迹摇床上培养，旋转速度以不产生气泡为宜。37℃振摇过夜。细胞注意避光。
16．去上清，加入新鲜10%FCS-DMEM。
17．加入200μl 1mM的阿糖胞苷/10ml培养基。在37.2℃，37.5%中培养孵育48小时以消除分裂的细胞。
18．换用新鲜10%FCS-DMEM，孵育恢复24小时。
19．重复17-18步骤，消除所有的分裂细胞。