星形胶质细胞是中枢神经系统中数量最多的胶质细胞，参与维持神经递质平衡、血脑屏障形成及神经修复等关键功能。其纯化培养是神经科学研究的基础技术之一。以下提供一种基于新生大鼠大脑皮层的星形胶质细胞纯化培养方法，通过机械分离、酶消化及化学抑制等手段获得高纯度细胞。

1. 组织分离：取孕16-18天的大鼠胚胎，无菌条件下分离新皮层，置于L-15培养基（或Hank's平衡盐溶液/DMEM，无Hepes）中，仔细剔除脑膜、血管、海马、尾核及其他非皮层组织。

2. 组织切碎：用解剖刀将皮层组织切成约1mm³的小块。

3. 胶原酶消化：用1ml枪头吸取250μl胶原酶储存液（1.33%，溶于L-15）加入1ml L-15（或DMEM）中。每2只鼠脑组织块使用1-1.5ml稀释胶原酶液，37℃水浴孵育30分钟。

4. 离心洗涤：1000rpm（约230g）离心5分钟，或3000rpm（约2000g）离心1分钟，弃上清。

5. 胰蛋白酶消化：在含EDTA-CMF的溶液中重悬细胞，与胰蛋白酶按1:4至1:10比例混合，根据消化情况调整比例。

6. 终止消化：加入胰蛋白酶抑制剂和DNase溶液，混合5分钟。

7. 再次离心：1000rpm（约230g）离心5分钟，或3000rpm（约2000g）离心1分钟，弃上清，加入500μl D-MEM-BS。

8. 单细胞悬液制备：轻轻吹打细胞，先用5ml枪头吹打10次，必要时用18-gauge针头吹打（避免产生气泡）。经200目或300目尼龙网过滤。

9. 接种培养：将细胞转移至含10%胎牛血清的DMEM培养瓶中，接种密度为2×10⁶/25cm²培养瓶或4-6×10⁶/75cm³培养瓶。在37.2℃、5% CO₂条件下培养。

10. 换液与融合：第2天换液，之后每3天换液。7-10天后细胞融合。

11. 纯化处理：细胞融合后，用封口膜密封瓶盖，置于轨迹摇床上，37℃振摇过夜（避光），转速以不产生气泡为宜。弃上清，加入新鲜10%FCS-DMEM。

12. 化学抑制：加入200μl 1mM阿糖胞苷/10ml培养基，孵育48小时以消除分裂细胞。换新鲜培养基恢复24小时。重复此步骤一次，以消除所有分裂细胞（如成纤维细胞），获得纯化的星形胶质细胞。