技术分享帖-脑片膜片钳实验流程
时间:2012-08-05 09:34 来源:网络 作者:未知 点击:次
记录前的准备: 实验室一 剥脑前准备: 取冰于冰盒在冰箱冷冻,冰盒盖子打开 倒剩余脑脊液于一大烧杯备用 冰冻好后放入冰盒内,注意弄碎冰盒内冰先 冰冻好后取切片槽于冰箱冰冻 将切片液与装脑空小杯放于冰盒 打麻药前: 取琼脂 取修块用培养皿于实验台,培养皿加少许纯水打湿后取下,用纯水冲洗培养皿 放滤纸,502 载脑台放于试验台,注意擦干上面的水 两刀片一于修块培养皿,一于切片机,刀片有胶一面向下 用勺取切片液于小杯,留一个坑,刚没过脑为宜,再加少许切片液 吸管,刷子放于试验台 大杯内切片液通氧,注意不要使冰堵住气孔 切琼脂 开切片机电源 取手术器械和纸于水池边备用 打麻药后: 取切片槽,粘通氧气管 加切片液,先加冰后加水 上切片槽,调整刀片至适当位置 放冰盒于水池边 取脑 取脑后: 载脑台涂502 粘琼脂 倒切片液于培养皿,下放一滤纸 取脑,切脑,粘脑 将载脑台放入切片槽,调节刀片高度 切脑完毕后的整理: 取一张吸水纸用于放洗后刀片 切完后,通氧至备用脑脊液杯,上盖塑料手套 剩余冰去水后倒至另一冰盒,装一半冰于冰箱,不盖盖 把放修块培养皿盒子内的水倒掉,擦干后放入冰箱 切片机用纯水冲两遍,擦干 所有器械用具用自来水冲洗完毕后,用纯水再冲两遍,或者用纯水泡,完了摆放整齐
实验二: 剥脑前准备: 开氧气 取切片液于孵育杯和切片液杯中,均通氧,其中切片液杯通氧15min 取冰于冰盒,内放切片液杯,载脑台(擦干上面水)和手术器械(大剪刀,小剪刀,大镊子,小镊子) 戴手套 开切片机,放一部分冰于切片机槽 取刀片,用酒精擦拭刀片,上刀片于切片机槽 取盛脑培养皿,修块培养皿,麻药,胶水,修脑刀片于相应位置备用 剥脑、切片: 取小鼠,打麻药,量为50 加切片液于修脑培养皿 小鼠麻醉后,剪脑,剥脑(中间一刀,两边各一刀) 冲洗大剪刀,涂胶水 修块(倾斜一定角度),粘脑 将载脑台放入切片机,加入切片液,往冰槽里加自来水 切脑完毕后整理: 将盛脑片杯放入水浴锅,孵育半小时后取出 切片机取下刀片,放掉冰槽内的水,用自来水冲洗后,用纯水冲一遍 切脑刀片刮下载脑台上剩余胶水和脑,然后一起扔掉 所有器械用自来水冲洗后放入相应位置摆好
记录: 实验室一: 开电源 切加液针头(切细线,各种技巧……) 开仪器,先开电脑 开电极拉制仪 取脑片找细胞 吸电极内液,拉电极 膜片钳操作(略) 实验室二: 离心管内装入脑脊液,调节灌流系统 取电极内液针管于试验台 拉电极 取脑片,找细胞,膜片钳实验
试验后整理: 实验室一: 关气 关仪器 取下电极头 各种器械清洗,然后纯水冲两遍 冲洗完后用擦镜纸吸干高倍镜上水,吸水纸吸干载脑台上水 关电源
实验室二: 关气 关仪器 擦镜纸擦干高倍镜头 纯水冲洗灌流系统 各种器械清洗,自来水既可
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