1．基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法 由于各种蛋白质分子中上述两种氨基酸的组成比例不同，特别是白蛋白含色氨酸为0.2%，而γ-球蛋白中含量达2%-3%，导致较大的差异。Lowry的改良法在酚试剂中加入Cu²⁺，集中原法和双缩脲反应两者的作用，使呈色灵敏度提高。其中75%的呈色依赖于Cu²⁺。反应产物最佳吸收峰在650-750nm，方法灵敏度为双缩脲方法的100倍左右。有利于检测较微量的蛋白质。但试剂反应仍易受多种化合物的干扰。

　　2．采用280nm和215/225紫外吸收值，计算蛋白质含量　280nm 是由于蛋白质分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特异性和准确性受蛋白分子中该种氨基酸的含量比例影响甚大。尿酸和肝红素在280nm附近有干扰。紫外区200-225nm是肽健的强吸收峰。在此区域其吸收值为280nm的10-30倍，将血清稀释1000-2000倍可以消除干扰物质的影响。

　　3．采用沉淀反应进行散射比浊法　用磺柳酸、三氯醋酸等配方，此方法甚为简便，不需特殊仪器，技术关键在于：①选择最佳试剂浓度及温度；②混匀技术；③选用的标准；④待测标本中的蛋白浓度。

　　4．染料结合法 蛋白质可与某些染料特异结合，如氨基黑（amino black）与考马亮蓝（comassive brilliant blue ）。这一性质除了可以用于电泳后的蛋白质区带染色，亦可用于总蛋白质的定量。缺点是多种蛋白质与染料的结合力不一致。考马亮蓝在与蛋白质结合后的吸收峰从465nm移向595nm，这一性质可用分光光度法来定量检测。

　　关于用化学方法测定白蛋白，现多采用特异性的染料（BCG或BCP）结合法，已于第一节中介绍。

　　（二）血清蛋白质的电泳分析

　　醋酸纤维薄膜（ACM）和琼脂糖凝胶是目前最广泛采用的两类介质。巴比妥缓冲液pH8.6，离子强度0.05，标本用量3-5μl，标准电泳条件为CAM每厘米宽电流0.75mA，琼脂糖约为每厘米宽10mA，电泳时间40-60分钟，电泳前沿达6cm左右。虽然目前已开展和应用不少个别蛋白质的测定方法，但血浆蛋白质电泳图谱至今仍然是了解血浆蛋白质全貌的有价值的方法，可用为初筛试验，以提供较全面的信息。正常血清电泳后可以很好地分为5条区带（Alb、α₁、α₂、β₁、β₂），新鲜标本可以分出β带（以C₃成分为主）。由于各条区带中各个蛋白质组分的重叠、覆盖（如CER常被α₂MG及Hp所掩盖），以及某些蛋白质染色带很浅（如脂蛋白和α₁糖蛋白），可以用其它染色方法辅助。目前除了常使用的氨基黑和丽春红染料外，还采用灵敏度更高的考马亮蓝。

　　用血清蛋白质电泳测定各组分的含量，通常可采用各区带的浓度百分比（%）或绝对浓度（g/L）表示之。

　　用醋酸纤维薄膜电泳测得正常小儿及成人血清蛋白质的参考值可参见表2-7。

　　在疾病情况下血清蛋白质可以出现多种变化。根据它们在血清蛋白质电泳图谱上的异常特征，不少学者曾试将其分为以下类型，参见表2-8及图2-1。

表2-7 各年龄组血清蛋白质电泳正常值（X±SD）范围

年龄	总蛋白质（g/L）	蛋白质各组分的浓度比（%）
白蛋白		α1	α2	β	γ
脐带血	57	69.4	2.5	5.4	7.0	15.4
	±12	±5.6	±1.0	±1.6	±2.4	±4.4
新生儿	60	64．2	3．5	14．1	9．2	6．2
	±12	±13.2	±3.6	±2.1	±2.4	±4.8
1-5岁	68	65.2	3.1	11.2	10.2	10.4
	±11	±7.8	±1.3	±2.7	±2.6	±5.5
6-12岁	69	61.7	3.0	10.5	10.2	14.7
	±14	±6.1	±1.8	±3.4	±2.0	±5.8
成人△1		64	2.8	6.6	7.2	14.4
		45-78	0.8-6.2	3.4-12	4.8-14	7.0-25
2		64	2.8	5.9	9.8	17.5
		55-71	0.9-4.8	2.6-9.2	6.3-13.3	12.2-22.3
3		68.7	3.1	6.0	8.2	13.8
		53-76.6	1.3-5.0	2.7-9.9	5.5-14.9	8.8-21.3
4		62.2	4.2	6.6	10.2	17.33
		47-77	0.7-7.6	2.4-10.8	4-16.4	8.8-25.7
5		65.7	2.28	5.7	8.8	17.5
		58.8-72.7	0.7-3.8	3.6-7.8	6.3-11.3	12.3-22.7

　　△资料取自不同作者：①上海医科大学n=50；②重庆医科大学n=123；③同济医科大学n=132；④苏州医学院n=100；⑤湖南医科大学n=100

表2-8　异常血清蛋白质电泳图谱的分型及其特征

血清蛋白质的图谱类型	总蛋白质	Alb	α1	α2		β		γ
1.低蛋白血症	↓↓	↓↓	N↑	N		↓		N↑
2.肾病型	↓↓	↓↓	↑	↑↑				不定
3.肝硬化型	↓N↑	↓↓	N↓	N↓				β-γ↑（融合）
4．急性炎症或急性时相反应症	N	↓N	↑	↑				N
5.慢性炎症型		↓	↑	↑				↑
6.弥漫性肝损害型	↓N	↓↓	↑↓					↑
7．弥漫宽γ球蛋白血症型	↑	↓N						↑↑
8.M蛋白血症型		在α-γ区带中出现M蛋白峰-M区带峰
9．高α2（β）-球蛋白血症		↓			↑↑		↑
10.妊娠型（高α型）	↓N	↓	↑				↑	N
11.蛋白质缺陷型		个别区带出现特征性缺乏

　　上述电泳图谱分型有助于临床疾病判断的参考。在某些蛋白质异常增多的情况下，可出现异常区带。如高浓度的αFP可以在Alb与α₁区带间出现一条清晰的新带（有人称之为肝癌型）；CRP异常增高可出现特殊界限的γ区带；单核细胞白血病可出现由于溶菌酶异常增多的γ后区带等；单克隆免疫球蛋白异常症（M蛋白血症）则在α-γ区带中出现一条很深的界限截然的M区带。